据报道， 全球范围内的育龄夫妻中 10％ ～ 15％患有不育， 其中因男性原因导致不育的占比约为 50％。 男性不育的病 因较多， 如染色体异常、 Y 染色体微缺失、 生殖系统炎症以及 内分泌疾病等， 其中 Y 染色体无精子因子 （AZF） 微缺失是导致男性不育的第二大因素。 AZF 是影响精子生成的重要基因， 不同区域 （AZFa、 AZFb、 AZFc） 的缺失有着不同的临床结局。 本研究以无精症或少精症患者为研究对象， 通过实时荧光定量 PCR 方法检测 AZF， 探讨男性无精症或少精症患者的 Y染色体微缺失情况， 为男性不育患者的诊疗提供依据。
一、资料与方法
一般资料 回顾性选取 2017 年 1 月至 2022 年 6 月在郑州大学第三附属医院就诊的 1 338 例男性不育患者为研究对象，按照精液常规检查结果分为三组， 即： 无精症组 （n ＝ 720），年龄 22 ～ 58 岁， 平均年龄 （31．15 ± 5．20） 岁； 严重少精症组（n ＝ 395）， 年龄 22 ～ 60 岁， 平均年龄 （31．23 ± 5．57） 岁； 少精症组 （n ＝ 223）， 年龄 22 ～ 51 岁， 平均年龄 （30．93 ± 5．57）岁。 选取同期 320 例健康男性为正常对照组， 年龄 22 ～ 56 岁，平均年龄 （31．78 ± 5．44） 岁。 四组研究对象的一般资料比较，差异无统计学意义 （P ＞0．05）。
入选标准纳入标准： ①均进行精液常规检查； ②符合WHO 第 5 版 《人类精液检查与处理实验室手册》 ［3］ 中的相关标准； ③均来自河南地区； ④对检测项目知情同意， 且配合度 良好。
排除标准： ①因内分泌紊乱、 生殖系统炎症、 精索静脉曲张等因素导致的无精症； ②生理性不育的患者； ③因其他病理因素导致不育的患者。
二、方法
1．精液常规检查 根据本院检验科 《精液采集指南》 采集精液， 按照 《人类精液检查与处理实验室手册》 中的标准进行常规精液分析， 检测结果参考以下标准进行判定： 每次射精精子总 数≥39 × 106 ／ mL， 精 子 向 前 运 动 百 分 率＞32％， 低 于 15 × 106 ／ mL 为少精， 低于 5 × 106 ／ mL 为严重少精。
2．2 Y 染色体微缺失 采集研究对象外周静脉血 2 ～ 3 mL，EDTA－K2 抗凝。 DNA 的提取按照 QIAamp 血液 DNA 纯化 Mini试剂盒说明书进行， 并置于－20 ℃的条件下保存待测， 检测试剂盒由上海投景生命科技股份有限公司生产。 共检测 AZFa、AZFb、 AZFc 三 个 区 域 的 6 个 序 列 ： sY84、 sY86、 sY127、sY134、 sY254、 sY255。 同时， 设置男性性别决定基因 （SRY）和编码锌指蛋白基因 （ZFY） 两个内对照基因。 PCR 扩增反应条件为： 第一阶段 50 ℃， 2 min； 第二阶段 95 ℃， 5 min； 第 三阶段 95 ℃， 15 s， 60 ℃， 30 s， 72 ℃， 30 s， 进行 38 个循环； 第四阶段 72 ℃， 5 min。 收集第三阶段 60 ℃的 FAM ／VIC ／ ROX／ Cy5 信号， 并在 FAM 通道结果显示为典型 S 型扩增曲线且 CT＜32 时， 进行结果判读。
3．统计学方法 使用 SPSS 22．0 统计软件处理数据。 计量资料以 x̄ ± s 表示， 采用 t 检验； 计数资料以 n （％） 表示， 采用 χ2检验或秩和检验。 P ＜0．05 为差异具有统计学意义。
三、结果
1．四组研究对象的 Y 染色体微缺失情况比较 无精症组和严重少精症组的 Y 染色体微缺失发生率均显著高于正常对照组，差异有统计学意义 （χ2 ＝ 30．629、 35．932， 均 P ＜0．001）。 在入组的研究对象中， AZFc 位点缺失 81 例 （4．9％）， AZFab 位点缺失 15 例 （0．9％）， AZFa 位点缺失 11 例 （0．7％）， AZFabc 位点缺失 6 例 （0．4％）， AZFb 位点缺失 5 例 （0．3％）， 其中 AZFc位点缺失在男性不育中占比最高， 为 4．9％。 见表 1。
2．Y 染色体微缺失患者的染色体核型分析 在 118 例 Y 染色体 微 缺 失 患 者 中 ， 共 有 25 例 染 色 体 核 型 异 常 ， 发 生 率 为21．2％， 其中以 47, XXY 核型的占比最高， 为 8．5％ （10 ／ 118），其 次 为 46, XY( 大 Y) 、 46, XY( 小 Y) 、 46, XY, 1qh ＋ ， 分 别 为3．3％、 2．5％、 2．5％。 见表 2。
四、 讨论
近年来， 随着新兴男性学科和遗传学的快速发展， 男性无 精症或少精症逐渐受到了临床医学的重视。 有研究显示，普通人群 Y 染色体微缺失的发生率为 1 ／ 4 000， 但在不育男性群体中的发生率会明显升高， 已成为了导致男性不育的第二大因素。 目前已经知道 Y 染色体微缺失是男性不育的主要诱因，但其具体缺失机制尚未达成统一共识。 AZFa、 AZFb、 AZFc 是AZF 的 3 个独立区域， AZFa 区域缺失会导致精子形成受阻；AZFb 区域缺失则会通过阻断精子发育， 使其停止在减数分裂前中期， 造成精子生成障碍； AZFc 缺失则会影响睾丸生精过程。 本研究结果显示， 在入组的研究对象中， 共有 118 例患者发生 Y 染色体微缺失， 发生率为 7．1％， 低于洛阳地区的10．12％， 但与广东清远 （6．1％）、 贵州 （7．13％）、 新疆 （6％）等地的缺失率相近， 表明 AZF 基因的缺失率存在地域性差 异 。 AZFc 位 点 缺 失 81 例 （ 4．9％ ） ， AZFab 位 点 缺 失 15 例（0．9％）， AZFa 位点缺失 11 例 （0．7％）， 提示 AZFc 位点缺失是Y 染色体微缺失的主要类型。 另外， 无精症组和严重少精症组的 Y 染色体微缺失发生率均显著高于正常对照组 （P ＜0．05），表明 Y 染色体微缺失与男性无精症或少精症密切相关。 通常而言， 染色体核型异常可导致无精症， 但染色体核型异常与 Y 染色体微缺失之间是否存在联系尚无报道明确阐述。 本研究结果显示， 在 118 例 Y 染色体微缺失患者中， 共有 25 例染色体核型异常， 发生率为 21．2％， 这提示对于无精症或少精症患者，应当同时进行遗传学分析和 Y 染色体微缺失检测。
综上所述， AZF 基因在男性的精子生成过程中有着主导作用， 不同区域的缺失会导致精液数量、 活力的异常， 进而影响生育。 Y 染色体微缺失检测是男性少精症或无精症等的首选临 床检测项目， 对男性不育的诊断有重要的指导价值。
备注：以上内容出自 临床医学工程 相关内容 【关键词】无精症 少精症 Y 染色体微缺失 精索静脉曲张
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