研究问题：接受药物辅助生殖（MAR）手术的妇女卵丘卵巢细胞（COC）的microRNA（miRNA）表达模式是否根据患者年龄和促性腺激素治疗策略进行差异调节？
摘要回答：母亲年龄是影响COCs中miRNA表达的独立因素，而促性腺激素治疗可能影响卵泡miRNA表达和IVF效果。
已经知道的是：女性不孕症的表观遗传机制是复杂的，而且研究很少。DNA甲基化、组蛋白修饰、miRNA和核小体定位通过正反馈和负反馈机制单独或交互影响细胞机制。miRNA是卵子发生、精子发生和早期胚胎发生过程中的重要调节因子，据报道在调节卵母细胞和COC之间的串扰中发挥作用。尽管已经在女性生殖组织（子宫内膜、子宫肌层、宫颈和卵巢）中进行了miRNome分析，但不孕症妇女的表观遗传修饰尚未得到详细研究。此外，MAR期间促性腺激素治疗对COCs中miRNA表达的影响尚未完全研究。
研究设计、大小、持续时间：本研究在53名接受MAR治疗的妇女的成熟中期II（MII）卵母细胞中获得的53个COC样本中进行。根据母亲年龄和促性腺激素，共收集38份用于分析开发的样本治疗分为四个预定亚组：36岁和重组人FSH（r-hFSH），n¼10；36岁，推荐使用人类促黄体生成激素（r-hLH），n¼10；35岁和r-hFSH，n¼9；35岁和r-hFSHþr-hLH，n¼9。测定miRNome谱并在亚组之间进行比较。通过定量聚合酶链反应（PCR），在其余15个样本（代表每个亚组）中验证定义的miRNA的表达。
参与者/材料、设置、方法：对COC进行富含miRNA的总RNA提取，并将其汇集在同质亚组中，以获得足够数量和质量的起始材料，以进行分析。每个合并样本均使用PCR分析系统进行了miRNA分析，以检测752个人类miRNA的表达，无需预扩增。使用delta-delta-Ct方法对数据进行分析，以相对定量和预测目标基因（至少有四种算法预测相同的miRNA-基因相互作用对（HIT）>4）。miRSystem数据库提供了共表达miRNA的功能注释富集（原始P值<0.05）。
主要结果和偶然性的作用：我们在每个亚组中发现了与年龄和MAR刺激相关的独特的miRNA表达谱。此外，通过比较分析，还发现了一些选择性和共表达的miRNA。37个miRNA簇在所有四个池中普遍但差异表达。在接受r-hFSHþr-hLH的妇女中，与单独接受r-hFSH的妇女相比，在年龄组（ 35或 36）之间观察到37个miRNA的表达调节存在显著差异。无论治疗结果如何，年轻患者的miRNA浓度和数量均高于老年患者。为检索常见miRNome图谱而进行的功能和表达研究显示，在卵母细胞生长和成熟、胚胎发育、类固醇生成、卵巢过度刺激、凋亡和细胞存活、胰高血糖素和脂质代谢以及细胞运输方面，生物功能丰富。37种常见miRNAs中得分最高的靶基因通路与丝裂原激活的蛋白激酶原（MAPK）信号通路、G-α信号通路、转录调节、紧密连接、RNA聚合酶I和III以及丝裂球转录有关。我们在COCs的miRNA图谱中发现了一个潜在的年龄和MAR刺激依赖性特征。
局限性和谨慎理由：我们不能排除其他未知个体遗传或临床因素可能干扰报告结果的可能性。由于miRNA分析是用预先确定的靶探针阵列进行的，因此本研究可能遗漏了其他可能受年龄和激素刺激调节的miRNA分子。
研究结果的更广泛含义：COCs中的miRNA表达受促性腺激素治疗的调节，并与年龄密切相关。更好地理解miRNAs的表达模式和功能可能会导致开发新的治疗方法来治疗卵巢功能障碍和提高老年妇女的生育能力。
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